J'essaie de mettre en évidence la présence de gouttelettes lipidiques à l'aide du Bodipy ( Bodipy Lipid Probes ref D3922), sur coupes congelées de 15µm (tissu de cerveau humain postmortem).
Les essais jusqu'à présent n'ont pas été très satisfaisants.
Malheureusement, très peu de coupes pour les essais.
Auriez-vous des conseils concernant le protocole, la dilution, le milieu de montage?
Voici le protocole que j'utilise:
Lames conservées à -80°C
Lame à T°amb. 30 min
PBS puis PBS-Tween 2x5 min
Bodipy 1/250 dans PBS à partir d'une sol stock à 5mg/ml dans du DMSO - Incubation 40 min à T°amb
PBS 3x5 min
Soudan black B
DAPI 1/5000/PBS 10 min
PBS 2x5 min
Milieu de montage : Fluoromount
D'avance, un grand merci
Bonjour,
le Tween est un détergent. Soit il enlève les lipides, soit il crée un bruit de fond sur la lame. Essayez sans tween.
Bonne journée
Nathalie