Bonjour, je souhaiterais connaitre un protocole pour fixer les embryons à E15 pour les inclure en paraffine. Nous avons fixé en pfa 4% overnight puis 2 lavages en PBS 1X 5 min puis incubation en éthanol 50%. La coupe en paraffine était terrible! Merci pour votre aide et suggestions. Delphine
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Bonjour Delphine,
Voici un extrait de notre bible en histo qui te donne toutes les recommandations pour les embryons.
Bonne journée,
Bonjour,
J'ai coupé des E14,5 de souris donc proche de votre stade. Je n'ai pas eu de soucis particulier mis à part le foie qui peut être un peu capricieux à la coupe (s'effrite facilement). Peut être que cela dépend du tissu que vous étudiez. Quel est votre soucis ?
Mon protocole ressemble beaucoup au votre: la fixation est d'une nuit en PFA 4% à 4°C. Je n'ai pas remarqué de sur-fixation mais je fais mes immunos sensibles sur des échantillons congelés. Après le PFA rinçages en PBS 1X puis attente en solution éthanol 70° si besoin mais évité autant que possible puis inclusion avec un automate à bains, programme classique pour nous, le cycle dure environ 14h. A la coupe je trouve ça plus facile de récupérer en refroidissant le bloc, récupération bain-marie.