Bonjour à toutes et tous,
Nous avons inclu en paraffine des genoux de rat avec le même programme d'imprégnation de genoux de souris que nous utilisons classiquement. Les genous ont bien été décalcifiés. Toutefois, à la coupe, on observe un espace sans paraffine entre les 2 articulations (fémur et tibia). On voit une démarcation entre le genou et la paraffine environnante. Je soupçonne que notre imprégnation en paraffine n'a pas été suffisante. Quelqu'un travaille-t-il en routine sur ce type d'articulation de rat et pourrait me conseiller sur les temps d'incubation des différents solvants et paraffine? Voici le procole sur notre ASP300 de Leica:
ETOH 70° - 2 x 30min
ETOH 96° - 2 x 1h
ETOH 100° - 1h + 1h30 + 2h
Xylène - 45min + 1h + 1h15
Paraffine - 45min + 1h15 + 2h
Merci pour votre aide et conseils,
Bonne soirée,
Nelly Pirot
Bonjour Nelly, en effet tes coupes sont très belles. En effet ton manque de coloration apparaît dans le cartilage calcifié mais ce n'est pas homogène et l'hypothèse de la décalcification est à suivre. Pour la décalcification nous utilisons l'immunocal (StatLab) qui est en effet à base d'acide formique 5%. Décalcification pendant 5-7 jours avec test chimique à la fin pour vérifier la complétude de la décalcification. Nous coupons également à 5 um. As-tu vérifié que ta lame de microtome est bien stable et n'oscille pas pendant la coupe ?
Bonne chance pour la suite. Et merci pour ton retour positif :)
Nathalie