Bonjour,
On me demande de couper et colorer en HE de la poudre d'os afin de voir si celle-ci est dépourvue de cellules ou non après traitement.
Je n'ai pas l'habitude de traiter ce type de tissus. Sur notre plateforme habituellement on travaille sur des tissus mous (déshydratation, inclusion en paraffine).
Quelle technique faut-il faire pour inclure en paraffine cet échantillon de poudre d'os?
Faut-il décalcifier, même si c'est de la poudre? (quel décalcifiant et combien de temps?)
Est ce qu'il est nécessaire de passer par une étape de déshydration, sachant que ma poudre d'os et déjà déshydratée?
A priori il existe des inclusions en agarose avant inclusion en paraffine, je ne connais pas cette technique?
J'ai beaucoup de questions car je ne sais pas comment aborder le projet.
Si vous pouvez me donner vos compétences dans le domaine cela m'aiderait beaucoup..
Merci par avance
Lorraine Novais Gameiro
En espérant que cela fonctionnera. Je serais curieuse d'avoir votre retour quand vous aurez trouvé la meilleure solution
Bonjour,
Je n'ai pas travaillé avec de la poudre d'os en particulier mais au laboratoire nous travaillons sur l'os et les biomatériaux de type osseux. N'ayant jamais eu à faire à votre problématique je vous donne mon avis en fonction de mon expérience. Pour votre problématique j'ai tendance à penser que vous risquez de perdre les cellules qui sont accrochées sur la poudre lors de la décalcification j'aurai tendance à vous conseiller une inclusion en résine. Pour étudier l'os et la qualité osseuse nous incluons en résine, c'est un process plus long que la paraffine et il faut être bien équipé mais ça à l'avantage d'éviter une décalcification. J'ai déjà eu des poudres de phosphate de calcium à inclure, comme c'était déshydraté j'ai tenté une imprégnation directement en résine sans les étapes de déshydratation mais cela n'a pas marché il faut déshydrater quand même pour que les solvants pénètrent bien à cœur. J'imagine que ce sera pareil en paraffine.
En paraffine, lorsque nous incluons des pellets nous faisons un gel dit Histogel (comme l'agarose), c'est très facile à utiliser. Il faut fondre la gélatine et l'appliquer sur le tissu, attendre que ça refroidisse et ça y est c'est pris dedans. Ça permet de maintenir notre échantillon et pouvoir le manipuler plus facilement sans le perdre, ensuite on le garde en éthanol 70°C si besoin puis inclusion paraffine. Je n'ai jamais tenté de faire une décalcification avec un échantillon mis en histogel.
Je reste à disposition si besoin
Maeva