Bonjour, j'ai préparé des cerveaux de souris de la façon suivante : perfusion par PFA 4% froide, post fixation en PFA 4% à 4°C, cryoconservation par sucrose 30% (les cerveaux on pris plus de 2 jours pour descendre en bas du tube et ils sont restés en totale 4 jours dans le sucrose 30%), puis congélation à isopentane froid entre 50 et 60 °C.

Les cerveaux ont étés gardés à -80°C jusqu'au jour des coupes au cryostat.

Malheureusement, au cryostat, les coupes ne glissent pas sur la lame, mes elle s'écrasent sur la lame et elles se collent. Impossible de récupérer des coupes entières.

Apparemment le tissue est trop élastique.

J'ai essayé de couper à -26°C pour TO, avec et sans lame anti-roll, de récupérer les coupes sur lame à TR ou froide, mais aucun de ces méthodes à marchés.

Est-ce que vous avez une idée de pourquoi le tissue est trop élastique ?

Est-ce que vous avez une autre solution pour couper ces cerveaux (14-16 µm) ?

Je vous remercie d'avance.