J'essaie de mettre en évidence la présence de gouttelettes lipidiques à l'aide du Bodipy ( Bodipy Lipid Probes ref D3922), sur coupes congelées de 15µm (tissu de cerveau humain postmortem).

Les essais jusqu'à présent n'ont pas été très satisfaisants.

Malheureusement, très peu de coupes pour les essais.

Auriez-vous des conseils concernant le protocole, la dilution, le milieu de montage?

Voici le protocole que j'utilise:

Lames conservées à -80°C

Lame à T°amb. 30 min

PBS puis PBS-Tween 2x5 min

Bodipy 1/250 dans PBS à partir d'une sol stock à 5mg/ml dans du DMSO - Incubation 40 min à T°amb

PBS 3x5 min

Soudan black B

DAPI 1/5000/PBS 10 min

PBS 2x5 min

Milieu de montage : Fluoromount

D'avance, un grand merci