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Immuno-histologie

Public·27 membres

Aurélie COVINHESAurélie COVINHES
Aurélie COVINHES

Solutions de démasquage

Bonjour,


Nous vous contactons car à ce jour, nous réalisons toutes nos mises au point sur notre automate Ventana. Toutefois, deux anticorps nécessitent un démasquage en PT module (F4/80 et CD45). Nous utilisons des solutions très coûteuses (solution Dako, Agilent), qui sont conservées 1 semaine et utilisées au maximum 3 fois, soit environ 120€ par utilisation.

 

Afin de remplacer ces solutions et ainsi réduire les coûts, nous avons réalisé différents tests avec des solutions commerciales (testées en PT Module ou au bain-marie, selon les recommandations du fournisseur) :

-          Vitro Master Diagnostica

-          Diapath


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Unknown member
Jan 19, 2024

Bonjour Maryline,


Merci pour votre réponse. Nous réalisons également un démasquage en pH6 à 95°C pendant 15min. En effet, il va peut être falloir qu'on envisage de changer de référence d'anticorps.


Merci,

Cordialement,


Aurélie Covinhes

Marie-Hélène  CanronMarie-Hélène Canron
Marie-Hélène Canron

Bonjour à tous

J'essaie de mettre en évidence la présence de gouttelettes lipidiques à l'aide du Bodipy ( Bodipy Lipid Probes ref D3922), sur coupes congelées de 15µm (tissu de cerveau humain postmortem).


Les essais jusqu'à présent n'ont pas été très satisfaisants.

Malheureusement, très peu de coupes pour les essais.


Auriez-vous des conseils concernant le protocole, la dilution, le milieu de montage?


Voici le protocole que j'utilise:


Lames conservées à -80°C

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Unknown member
Dec 11, 2023

Bonjour,

le Tween est un détergent. Soit il enlève les lipides, soit il crée un bruit de fond sur la lame. Essayez sans tween.

Bonne journée

Nathalie

Rachel OnifarasoaniainaRachel Onifarasoaniaina
Rachel Onifarasoaniaina

problème d'isotype contrôle

Bonjour à tous,

Je viens vers vous car je rencontre des problèmes en immunomarquage. J'ai fait des marquages avec des isotypes contrôles (IgG rabbit et IgG souris) sur des peaux humaines saines et malades (dermatose inflammatoire). A ma grande surprise, j'ai des marquages sur les lames avec dermatose inflammatoire et rien sur la peau saine. Ci-joint une illustration. Avez vous des explications?

En vous remerciant d'avance,

Cordialement,

Rachel Onifarasoaniaina



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Unknown member
Dec 11, 2023

Bonjour, avez-vous essayé un autre système de révélation (autre que HRP), comme phosphatase alcaline ou même de la fluo car il semble que la réaction soit spécifique d'un certain type cellulaire, qui pourrait être riche en HRP. Sinon saturer plus avec H2O2 ? Ou encore avec un anti CD16/CD32 humain (utilisé en FACS pour saturer également) ?

Bonne chance

Nathalie


celine cojeanceline cojean
celine cojean

Neutrophiles IHC

Bonjour,

Quel anticorps utilisez vous pour marquer les neutrophiles chez la souris, en tissus FFPE , dans mon cas la peau. J'ai jusqu'a present uitlise le Ly6B2, mais j'ai des soucis car certaines peaux sont negatives.

Merci pour vos retours


Celine


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Unknown member
Jan 16, 2024

Bonjour,


On utilise Ly6G pour marquer les neutrophiles, on a un anticorps de chez cell signaling qui marche sur tissu murin FFPE.

A+

Nicolas


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