La stéatose hépatique associée à un dysfonctionnement métabolique est la maladie chronique du foie la plus courante et sa prévalence augmente rapidement dans les pays occidentaux en raison de l'abus d'alcool et d'un régime alimentaire hypercalorique. La forme grave de la MAFLD peut évoluer vers la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire (CHC), quatrième cause de mortalité liée au cancer dans le monde. Plusieurs modèles expérimentaux ont démontré le rôle clé joué par les cellules immunitaires et les cytokines dans la pathogenèse du CHC. Il existe cependant une grande hétérogénéité inter-tumorale et même intra-tumorale en ce qui concerne cet environnement immunitaire et cytokinique. Une compréhension approfondie du paysage immunitaire du CHC est encore limitée et, jusqu'à présent, essentiellement restreinte à l'analyse de l'ARN d'une seule cellule. Il existe un besoin non satisfait de quantifier les sous-ensembles de cellules immunitaires, leur statut fonctionnel et leur disposition spatiale dans le microenvironnement afin de mieux comprendre l'hétérogénéité de la progression tumorale et de développer de nouvelles thérapies.

L'immunofluorescence conventionnelle est une technique de diagnostic largement utilisée en pathologie tissulaire. Cependant, cette technique se limite à la quantification de quelques marqueurs par section de tissu et nécessite donc plusieurs lames pour travailler avec un large panel de marqueurs, ce qui est difficilement réalisable avec des tissus humains. L'immunofluorescence multiplex (mIF) est une des technologie émergente développée pour surmonter cette contrainte, permettant la détection simultanée de nombreux marqueurs sur une seule section de tissu.

Mon projet tend à développer un panel de 24 marqueurs à utiliser sur des tissus FFPE utilisant une technologie innovante, CellDIVETM, reposant sur des cycles de marquages itératifs. Le procédé CellDIVETM permet des cycles séquentiels avec des anticorps couplés à des colorants de type cyanine, séparés par une inactivation chimique de la fluorescence après chaque cycle d'acquisition. Ce système présente également l'avantage de soustraire à la fois le chevauchement spectral et l'auto fluorescence des tissus. Nous présenterons ici notre panel de marqueurs ainsi que des images d’immunofluorescence de CHC obtenues en CellDIVETM permettant de caractériser la structure tissulaire, les cellules myéloïdes et lymphoïdes et le développement de la tumeur. Nous l’appliquerons à une bio banque de foies de patients atteints de carcinome hépatocellulaire sur fond de dysfonctionnement métabolique et stratifiés selon la consommation d’alcool. Cette cohorte permettra de caractériser une signature de l’infiltrat immunitaire basée sur le nombre de cellules de nos différents sous types et de leur disposition spatiale. Ce panel serait également applicable à d'autres pathologies hépatiques et plus généralement lorsque la localisation spatiale des cellules immunitaires dans le foie est recherchée.