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6 - Coupes histologiques de tissus calcifiés et/ou implantés à l’aide du microtome
laser Tissue Surgeon

Maeva DUTILLEUL1, Yoan LE GUENNEC1, Joëlle VÉZIERS1, Julie LESOEUR1, Jérôme GUICHEUX1, Marie-Astrid BOUTET1

1 Nantes Université, Oniris, CHU Nantes, INSERM, Regenerative Medicine and Skeleton, RMeS, Plateforme SC3M (Service commun de microscopie électronique, microcaractérisation et morpho-histologie-imagerie fonctionnelle), UMR1229, F44000 Nantes, France

Le Tissue Surgeon (LLS Rowiak®) permet de réaliser des coupes fines de tissus (10 à 100µm d’épaisseur pour les tissus mous et jusqu’à 70µm pour les tissus durs) inclus en résine pour des applications en recherche dans différents domaines (orthopédie, médecine oro-faciale, cardiologie, rhumatologie, médecine régénératrice). Il est équipé pour cela d’un femto laser qui permet des coupes «sans contact» à l’inverse du microtome, ainsi que d’un système de tomographie en cohérence optique (optical coherence tomography – OCT) qui permet de repérer les tissus (matières, reliefs). Les échantillons à couper peuvent mesurer jusqu’à 40x40mm (taille d’une méga lame). Brièvement, les blocs sont polis, collés sur une lame d’histologie en verre, découpés à l’aide du laser grâce à l’établissement de paramètres précis propres à chaque échantillon, puis les coupes sont elles-mêmes polies et peuvent être utilisées pour diverses applications.

Depuis l’arrivée du Tissue Surgeon sur la plateforme ouverte SC3M (Service commun de microscopie électronique, microcaractérisation et morpho-histologie-imagerie fonctionnelle), nous avons pu valider la réalisation de coupes fines de tissus calcifiés, de certains biomatériaux et de stents de vaisseaux. Après déplastification, ces coupes ont été utilisées pour effectuer des colorations histologiques (e.g., trichrome de
Goldner, hématoxyline & éosine, Movat) et immunohistochimiques (e.g., CD31, collagène de type II) avec succès. A noter, malgré l’impossibilité de couper directement du titane ou des biomatériaux à base de céramique, le Tissue Surgeon permet dans tous les cas d’obtenir des marges de coupe très nettes pour une analyse précise des interactions tissu-matériau.

De plus, grâce à un protocole récemment développé par la société LLS Rowiak, le Tissue Surgeon peut être utilisé pour la découpe de tissus frais, qui sont placés dans une chambre d’incubation sur une lame en verre dans un liquide de préservation (ex : PBS, RNA later). La morphologie globale du tissu peut être visualisé par OCT avant de réaliser une découpe planaire ou 3D dans une région d’intérêt. Cette approche est en cours de validation au sein de notre plateforme et pourrait permettre de réaliser des analyses transcriptomiques et protéomiques sur des zones spécifiques (e.g., zones de repousse osseuse en périphérie des biomatériaux), ouvrant des perspectives intéressantes pour l’analyse des tissus durs.

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