Détection d'activités protéolytiques par zymographie in situ

2019, Revue française d'histotechnologie, vol: 31, n°: 1, p: 19-28

 

Bonnart, Chrystelle

 

DOI : https://doi.org/10.25830/afh.rfh.2019.31.1.19

RSD, Université de Toulouse, INSERM, INRA, ENVT, UPS, Toulouse, France

CHU Purpan BP3028, 31024 Toulouse Cedex 3, France

 

chrystelle.bonnart@inserm.fr

 

lien: https://www.afhisto.fr/revue-2019

 

Résumé: Les protéases jouent des rôles essentiels en physiologie et en physiopathologie. Pour bien comprendre la fonction d’une protéase donnée, il est important de déterminer son origine cellulaire et de pouvoir ainsi visualiser son activité dans les tissus. La zymographie in situ est une technique appropriée pour répondre à ces questions. Pour effectuer une zymographie in situ, des cryosections de tissus non fixés sont incubées avec un substrat protéique lié à un fluorochrome désactivé. Lors de la digestion de ce substrat par des protéases endogènes, les produits de clivage émettent de la fluorescence permettant leur visualisation par imagerie à fluorescence. Différents types d’activités protéolytiques peuvent être ainsi révélés en fonction de la nature des substrats, de la composition du tampon et de l'utilisation d'inhibiteurs de protéase. L'intérêt de cette technique est de pouvoir localiser précisément l’activité de la protéase dans un tissu et de corréler l'intensité de cette activité avec un contexte physiopathologique. Cette approche est utile dans différentes situations où les protéases actives sont soupçonnées jouer un rôle, comme dans certaines pathologies cutanées et digestives.

 

Mots-clés: zymographie in situ ; protéases

 

English title: Detection of proteolytic activities by in situ zymography

 

Abstract: Proteases play essential roles in physiology and pathophysiology. To fully understand the function of a given protease, it is important to determine its cellular origin and thus be able to visualize its activity in the tissue. In situ zymography is an appropriate technique to answer these questions. To perform in situ zymography, unfixed tissue cryosections are incubated with a protein substrate bound to a quenched fluorochrome. Upon digestion of this substrate by endogenous proteases, cleavage products emit fluorescence, allowing their visualization by fluorescent imagery. Different types of proteolytic activities may be revealed according to the nature of the substrates, the composition of the buffer and the use of protease inhibitors. The interest of this technique is to be able to precisely localize protease activity within a tissue, and to correlate the intensity of this activity with a pathophysiological context. This approach is useful in different situations where active proteases are suspected to play a role, like in some skin and gut pathologies.

 

Keywords: in situ zymography ; proteases

 

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Disponibilité du pdf: embargo d'un an à partir de la date de parution (juin de l’année d’édition)

 

Comment citer cet article (How to cite this article):

 

Bonnart, Chrystelle 2019, Détection d'activités protéolytiques par zymographie in situ, Revue française d'histotechnologie, vol:31, n°1, p: 19-28, https://doi.org/10.25830/afh.rfh.2019.31.1.19

 

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