17 - Le multiplexing pour une meilleure compréhension de l’environnement tissulaire : présentation de quelques méthodes
Stéphanie BLANDIN1, Aurélie DOMÉNÉ1, Philippe HULIN1, Aurélie JOUSSAUME1,2, Jérôme MARTIN2, Steven NEDELLEC1, Perrine PAUL-GILLOTEAUX1
1 MicroPICell, BioCore, IRSUN, 8 Quai Moncousu – 44007 Nantes - France
2 CR2TI, 30 Boulevard Jean Monnet – 44000 Nantes - France
Les techniques d’immunomarquages permettent la mise en évidence de la localisation in situ de protéines, qu’elles soient tissulaires ou cellulaires, cytoplasmiques, membranaires ou nucléaires, et spécifiques d’une fonction ou d’un type cellulaire. Les avancées récentes des immunomarquages ont permis l’émergence du multiplexing. Cette technique permet la révélation simultanée de plusieurs marqueurs en s’affranchissant du nombre de marqueurs limité (colorimétrie ou fluorescence classique) et sur la même coupe de tissu, contrairement à l’utilisation de coupes sériées. Elle s’est développée à partir de l’évolution d’une part, des possibilités de révélation des immunomarqueurs et d’autre part, des systèmes d’acquisition d’images plus performants en sensibilité de détection et en résolution. Le multiplexing, quelqu’en soit la méthode de révélation, permet de comprendre l’organisation des populations cellulaires au niveau du tissu, par exemple pour l’étude du microenvironnement tumoral ou inflammatoire.
Différentes méthodes de multiplexing en immunofluorescence existent dont la pertinence dépend de la question scientifique. Le poster présente quelques-unes de ces méthodes: principe, étapes et point d’attention associés, acquisition et analyse des images, sur différents projets et types de tissus:
1) la méthode multiplex avec le système d’amplification du signal à la tyramide (TSA) couplé à des fluorochromes Opal®, développée par la société Akoya Biosciences®. Cette méthode permet la révélation simultanée jusqu’à 7 marqueurs.
2) la méthode multiplex grâce au système VectaPlex® développé par la société Vector Laboratories®. Cette méthode peut également être combinée à la précédente.
3) la méthode multiplex Codex® (Co-Detection by IndeXing) réalisée grâce au PhenocyclerTM développé par la société Akoya Biosciences®. Cette méthode permet la révélation de plusieurs dizaines de marqueurs.
