Dans le cadre de la caractérisation de structures corticales du rein que sont les glomérules et les tubes contournés proximaux, nous avons utilisé des anticorps (Ac) dirigés contre la podocine, la protéine 1 de la tumeur de Wilms (WT1) et la mégaline, respectivement. La podocine joue un rôle dans la régulation de la perméabilité glomérulaire et est un marqueur des podocytes. WT1 par sa fonction de liaison à des séquences d’ADN spécifiques est un facteur de transcription important dans le développement du système uro-génital et est de ce fait un marqueur des précurseurs podocytaires. La mégaline médie l’absorption tubulaire et la clairance de la leptine et est un marqueur des tubes contournés proximaux.
Les trois anticorps spécifiques utilisés sont :
1) pour WT1*, un Ac monoclonal de lapin dont l’épitope correspondant est démasqué par uneincubation dans un tampon Tris-EDTA pH 9.0 à 95°C pendant40 minutes,
2) pour la podocine**, un Ac polyclonal de lapin démasqué par une incubation dans le tampon10mMde citratedesodium pH6.0 à 91°C pendan t24 minutes,
3) et enfin pour la mégaline***, un Ac monoclonal de lapin reconnaissant un épitope démasqué par une incubation dans le tampon 10mM de citrate de sodium pH 6.0 à 91°C pendant 24 minutes.
Malgré les avancées récentes dans la combinaison d’Ac primaires de même espèce et le fait d’utiliser des étapes de stripping à la chaleur entre chaque cycle de marquage, nous nous sommes posés la question de la combinaison de ces différents démasquages dans le cas de multiplexing. Ce poster démontre la faisabilité de la combinaison de différents protocoles de démasquages antigéniques à la chaleur dans le cadre de l’utilisation d’anticorps primaires de même espèce.
* Abcam, Ref. ab267377, dilution 1/500
** Abcam, Ref. ab50339, dilution 1/6000
*** Abcam, Ref. ab76969, dilution 1/1000