Fixation d’explants de peau humaine au GAF®, une alternative au formol?
Fanny RICHARD 1, Anissa SAHEBDEEN 1, Céline ASIK 1, Ingrid MOLAWKA 1, Agnès TESSIER 1, Nada ANDRE 1, Youcef BEN KHALIFA 1
Le formol est un réactif couramment utilisé dans les laboratoires d’histologie, afin de fixer les échantillons biologiques. Cependant, étant classifié comme un agent Cancérigène, Mutagène, Reprotoxique de type I, le code du travail impose une substitution de ce produit lorsque cela est possible, afin de protéger les salariés. L’objectif de cette étude est d’identifier une alternative au formol permettant de fixer des échantillons de peau tout en préservant la structure et les protéines de la peau. Un réactif de fixation non dangereux, le Glyoxal Acid-Free, ou GAF®, a été identifié et testé sur des explants de peau humaine. Des échantillons de peau de la région abdominale de deux donneurs féminins d’âges différents (35 et 50 ans) ont été collectés et préparés afin d’obtenir des disques de 1,13 cm² dépourvus d’hypoderme. Ces explants de peau ont été immergés toute une nuit dans une solution de formol 10% ou de GAF®, puis déshydratés et inclus en paraffine le lendemain. Des coupes de 4 µm d’épaisseur ont ensuite été réalisées à l’aide d’un microtome. Enfin, les lames ont été colorées à l’hématoxyline-éosine (HE) ou marquées à l’aide d’un anticorps anti-filaggrine, une protéine localisée au niveau de la couche supérieure de l’épiderme. En observant les résultats, que ce soit sur les lames HE, où les différentes couches de la peau sont bien visibles, ou sur les lames immunomarquées, où la filaggrine est bien visible et spécifiquement marquée, aucune différence n’est visible entre les explants fixés au formol ou au GAF®. Ces premiers résultats nous encouragent donc à poursuivre les essais sur d’autres protéines d’intérêt dans la peau afin de valider que le GAF® peut remplacer le formol dans nos études sans impacter la qualité de nos immunomarquages.
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