Le contexte immunitaire influence la progression tumorale et le devenir des patients sous thérapies antitumorales. Plus précisément, le microenvironnement tumoral (TME) influence la progression des tumeurs et est désormais la cible des nouvelles immunothérapies. L’étude de cet environnement est désormais indispensable pour accompagner les traitements des patients. L’objectif de cette étude est de développer et d’évaluer des panels d’immunohistochimie (IHC) multiplex pour analyser le TME. L’IHC multiplex peut permettre d’analyser la complexité du TME et d’étudier directement in situ les interactions entre les nombreuses populations cellulaires qui le composent. Dans cette étude préliminaire, nous avons développé un panel pour l’analyse des lymphocytes infiltrants la tumeur (TIL), et réalisé une évaluation de la méthode d’analyse des images. La méthode utilisée est une IHC multiplex révélée en immunofluorescence (IF) avec le système d’amplification du signal à la tyramide (TSA) développé par Perkin Elmer sous le nom de système Opal suite à un partenariat. Cette technologie a été notamment adaptée sur l’automate Leica BOND RXm utilisé pour cette étude. Pour l’analyse des TIL, nous avons développé un panel CD4, CD8 et CD20 permettant de cibler respectivement les lymphocytes T helper, T cytotoxiques et B. Après l’IF multiplex et le scan des lames, les marqueurs ont été quantifiés par analyse d’image en utilisant le logiciel CaloPix de Tribvn. La méthode d’analyse a été évaluée en étudiant la justesse des résultats quantitatifs obtenus en multiplex par rapport aux analyses simples et la reproductibilité du process, réalisé par plusieurs opérateurs. Ces analyses ont été faites sur plusieurs types tumoraux : cancer du poumon (NSCLC), du sein (BC) du pancréas (PC), du cerveau, un glioblastome (G) et un cancer du foie (HCC). La variabilité induite par la nature de l’échantillon a également été adressée. Résultats : Nous avons observé que la justesse de l’analyse multiplex est impactée par le type tumoral étudié. Une bonne correspondance entre les simplex et le multiplex est observée pour les BC, PC et NSCL, mais est plus difficile à obtenir pour le Glioblastome et le HCC. La reproductibilité est également impactée par la nature du tissu. Ces premiers résultats montrent que la standardisation de la méthode d’analyse reste à parfaire pour diminuer ces variations. 163 Revue Française d’Histotechnologie 2018 - Vol. 30 - n°1 En conclusion, le développement de nouveaux biomarqueurs in situ est fondamental pour comprendre le fonctionnement du microenvironnement tumoral et des nouveaux produits d’immunothérapie. Nous décrivons ici un exemple de développement d’IHC multiplex quantitative, outil qui sera essentiel pour analyser le système immunitaire in situ et pour accompagner les traitements des patients. Nous soulignons également que les méthodes d’analyses de ces IHC nécessiteront des process de validations à ne pas négliger avant une utilisation automatisée.