Le carcinome hépatocellulaire (CHC), responsable de 800 000 décès annuels dans le monde, survient généralement chez des patients atteints de maladies hépatiques chroniques fibro-inflammatoires. Malgré les progrès contre les hépatites B et C, l’incidence du CHC augmente, notamment en raison de la forte prévalence de l’obésité, associant la stéatose hépatique aux dysfonctions métaboliques. En raison de son hétérogénéité, sa réponse aux inhibiteurs des points de contrôle immunitaire reste limitée. Malgré une architecture très cellulaire, 30 % des CHCs contiennent des foyers de fibrose intra-tumorale. Ces foyers sont enrichis en cellules cancéreuses souches et progénitrices, avec une faible différenciation cytoarchitecturale et une expression de marqueurs d’évolution péjorative des patients. Après une étude de protéomique quantitative de la matrice extracellulaire (MEC) des CHCs, nous avons recouru à l’immunohistochimie multiplex pour étudier les relations topographiques entre plusieurs cibles moléculaires sur des tissus congelés non fixés d’archive (≥ 15 ans à -80 °C). Nous avons établi une preuve de concept sur trois CHCs. Parmi les 13 protéines étudiées, 10 étaient des composants de la MEC choisis en raison de leur valeur prédictive de l’agressivité tumorale et trois en tant que repères topographiques identifiant, respectivement, les fibroblastes associés au cancer (CAFs), les cellules endothéliales et les leucocytes. L’acquisition d’images a mis en évidence des nodules de cellules tumorales entourés par une maille d’élastine, fibrilline-1, périostine, collagènes de type I et V, contenant la chimioquine CXCL13 ou le facteur de croissance GDF15. Les leucocytes et les CAFs s’associaient à ces assemblages, entourant les nodules tumoraux richement vascularisés. En conclusion, l’immunohistochimie multiplex permet des analyses corrélatives et de proximité qui révèlent l'organisation topographique du microenvironnement tumoral.