Alternative au DAPI
Bonjour,
Je dois réaliser une contre coloration en fluorescence autre que le DAPI, car je souhaiterais qu'elle soit excitable en 488nm.
Auriez-vous des idées et des conseils à me donner ?
Je pensais au marquage du reticulum endoplasmique peut-être ? CellLight™ RE-GFP, BacMam 2.0, est-ce quelqu'un l'a déjà testé sur des tissus ?
J'ai également testé le neurotrace qui fonctionne bien sur des tissus, mais pas sur des échantillons transparisés.
Merci à vous.
Bonne journée
Fanny
39 vues
bonjour Fanny
Il semble que vous transparisiez vos echantillons en fin de manip. si votre probleme est que le DAPI se defixe lors du clearing, il est probable qu aucun colorant (type BET, TOPRO3, methylgreen,...) ne fonctionnera sur le noyau. quel type de clearing faite vous? quel est l agent qui homogenise l indice de refraction?
ce qui m apparait le plus simple, est d utiliser un anticorps primaire marque 488 que vous ajoutez en meme temps soit que le primaire de l IF soit avec le secondaire,(ou a posteriori des secondaires, ) il faut qu il soit anti histone, ou contre une proteine de la membrane nucleaire pour marquer les noyaux par ex, et fait chez un animal autre que votre primaire de l IF.
je suis interessee par votre retour, merci.
bon courage