Bonjour,

Dans les premières étapes de la transcriptomique spatiale, j'ai réalisé une coloration H&E qui ne m'a pas pas satisfait, alors je sollicite votre aide pour l'améliorer.

Je résume le protocole de 10X Genomics, avec les [adaptations apportées].

1. Hematoxylin 1 min et lavages (eau) [nous avons Harris hematoxylin]

2. Bluing Buffer 1 min et lavages (eau) [nous avons sauté cette étape]

3. Alcoholic eosin 1 min («DO NOT use diluted Eosin») et lavages (eau) [nous avons Eosin G or Y alcoholic 0.5%]

4. Montage au glycérol 85%

5. Photo

6. Démontage pour destaining et decrosslinking etc.

Je trouve que la coloration est trop dominée par l'éosine et que le tissu a l'air un peu flou. Je fais des tests pour moduler les temps de H et E. Le bluing buffer ne semble pas fréquemment utilisé (il accentue probablement le marquage nucléaire). J'envisageais diluer l'éosine, mais ça semble déconseillé? En fait, je suis preneur de tout commentaire ou recommandation pour améliorer l'aspect du tissu...

Enfin, considérant que les réactifs doivent être exempts de RNase, je me demande si certains fournisseurs sont préférables ou bien si le grade histologique est vraisemblablement adapté pour une étude des ARN si la bouteille n'est pas contaminée par les utilisateurs...

Merci de votre attention,

Histologiquement vôtre,

Alexandre