Combinaison de deux systèmes de démasquage à la chaleur pour une détection par immunofluorescence multiplex de structures rénales par des anticorps primaires de même espèce
2026, Revue française d'histotechnologie, vol: 38, n°:1, p 61-75
ACCART Nathalie et LAMBERT Christian
DOI :
Novartis Pharma AG - Biomedical Research, Diseases of Aging and Regenerative Medicine , Postfach – 4057 BALE - Suisse
Résumé :
Dans le cadre de la caractérisation de structures corticales du rein que sont les glomérules et les tubes contournés proximaux (TCP), nous avons utilisé des anticorps (Ac) dirigés contre la podocine, la protéine 1 de la tumeur de Wilms (WT1) et la mégaline. La podocine joue un rôle dans la régulation de la perméabilité glomérulaire et est un marqueur des podocytes. WT1 par sa fonction de liaison à des séquences d’acide désoxyribonucléique (ADN) spécifiques est un facteur de transcription important dans le développement du système uro-génital et est de ce fait un marqueur des précurseurs podocytaires. La mégaline médie l’absorption tubulaire et la clairance de la leptine et est un marqueur des TCP.
Les trois anticorps spécifiques et conditions utilisés pour la détection de ces trois protéines d’intérêt sont :
1) pour WT1, un Ac monoclonal de lapin (ab267377, Abcam dilué à 1/500) dont l’épitope correspondant est démasqué par une incubation dans un tampon TrisEDTA pH 8 à 95 °C pendant 40 minutes,
2) pour la podocine, un Ac polyclonal de lapin (ab50339, Abcam dilué à 1/6000) démasqué par une incubation dans un tampon 10 mM de citrate de sodium pH 6 à 91 °C pendant 24 minutes,
3) et enfin pour la mégaline, un Ac monoclonal de lapin (ab76969, Abcam dilué à 1/1000) reconnaissant un épitope démasqué par une incubation dans un tampon 10 mM de citrate de sodium pH 6 à 91 °C pendant 24 minutes.
Malgré les avancées récentes dans la combinaison d’Ac primaires de même espèce et le fait d’utiliser des étapes de décapage à la chaleur entre chaque cycle de marquage, nous nous sommes posés la question de la combinaison de ces différents démasquages dans le cas de multiplexing. Cet article démontre la faisabilité de la combinaison de différents protocoles de démasquages antigéniques à la chaleur
dans le cadre de l’utilisation d’anticorps primaires de même espèce.
Mots-clés :
Glomérule, Immunofluorescence, Mégaline, Multiplexage, Podocine, Protéine 1 de la tumeur de Wilms, Rein, Tubes Contournés Proximaux (TCP)
English title :
Combination of two heat-based unmasking systems for an immunofluorescence multiplex detection of renal structures by primary antibodies from the same species
Abstract :
In the context of the characterization of cortical structures of the kidney such as glomeruli and proximal convoluted tubules, antibodies (Ab) were used against podocin, Wilms tumor protein 1 (WT1) and megalin, respectively. Podocin plays a role in the regulation of glomerular permeability and is a marker of podocytes. WT1, through its binding function to specific deoxyribonucleic acid (DNA) sequences, is an important transcription factor in the development of the urogenital system and is therefore a marker of podocyte precursors. Megalin mediates tubular absorption and clearance of leptin and is a marker of proximal convoluted tubules. The three specific antibodies and conditions used for the detection of those three proteins of interest are:
1) for WT1, a rabbit monoclonal Ab (ab267377, Abcam diluted at 1/500) whose corresponding epitope is unmasked by incubation in Tris-EDTA buffer pH 8.0 at 95 °C for 40 minutes,
2) for podocin, a rabbit polyclonal Ab (ab50339, Abcam diluted at 1/6000) unmasked by incubation in 10 mM buffer of sodium citrate pH 6.0 at 91 °C for 24 minutes,
3) and finally, for megalin, a rabbit monoclonal Ab (ab76969, Abcam diluted at 1/1000) recognizing an epitope unmasked by incubation in 10 mM buffer of sodium citrate pH 6.0 at 91 °C for 24 minutes.
Despite recent advances in the combination of primary antibodies of the same species and the use of heat stripping steps between each labeling cycle, we have wondered about the combination of these different unmasking steps in the case of multiplexing. This article demonstrates the feasibility of combining different heat antigen unmasking protocols in the context of the use of primary antibodies of the same species.
Keywords :
Glomerulus, Immunofluorescence, Kidney, Megalin, Multiplexing, Podocin, Proximal Convoluted Tubules, Wilms Tumor Protein 1.
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Comment citer cet article (How to cite this article) :
ACCART Nathalie et LAMBERT Christian 2026, combinaison de deux systèmes de démasquage à la chaleur pour une détection par immunofluorescence multiplex de structures rénales par des anticorps primaires de même espèce, Revue française d'histotechnogie, vol: 38, n° 1, p: 61-75
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