Congélation peau de souris
Bonjour,
Quelqu'un aurait-il de l'expérience dans la congélation de peaux de souris? Doit-elle se réaliser dans des conditions particulières mise à part l'utilisation d'isopentane refroidi?
La cryoprotection (sucrose par ex. ou autre?) est-elle nécessaire/indispensable?
Enfin, avez-vous des astuces ou pratiques particulières concernant la coupe au cryostat (température, épaisseur de coup, vitesse...)?
Merci pour vos retours😉!
Stéphanie
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bonjour Stephanie
j ai deja coupe de la peau de souris, c est un peu complique a prelever car si tu veux voir les follicules pileux il faut couper selon le "sens du poil". difficile d expliquer.de plus la peau se roule au prelevement et a la congelation. pour eviter cela je decoupe une petite lame rectangulaire de 3mX2cm environ, dans de la cartonette (de la chemise carton de bureau) de couleur. je decoupe un volet de peau sur 3 cotes, rectangulaire , le plus grand cote dans le sens du poil, je glisse la cartonette sous le volet de peau pour l applique bien a plat et ensuite je detache le volet. qd je coupe au cryostat 7microns, je coupe avec la cartonette.. comme elle est coloree je la vois, qd je lave la coupe sur la lame elle se decollera seule. je coupe selon le grand cote du rectangle pour etre dans l axe du follicule pileux.
pour plus d infos il me faut rechercher dans mes notes anciennes si tu as besoin. fixation PFA ou formalin. Aujourd hui j essayerai le glyoxal acid free (GAF) de chez Addax qui est plus securit pour le manipulateur.
mais c etait le prelevement qui me semblait le plus critique.
si tu ne coupes pas selon le grand axe, tu ne verras que des tranches de saucisson au niveau du follicule.. de plus j avais des souris KO avec un poil hirsute! une complication de plus!
n hesite pas a revenir vers moi si tu as besoin
Brigitte