Bonjour à toutes et tous,

Je sollicite vos retours d'expérience concernant un problème récurrent de détachement de tissu que je rencontre durant des immunomarquages sur lame à partir de coupes FFPE.

Les tissus en question sont des adénomes pléomorphes des glandes salivaires humaines, préparés en blocs FFPE entre 2014 et 2022. Ils contiennent des quantités notables de tissu adipeux ou de matrice mixoïde (glycosaminoglycanes, collagène, mucines, cartilage…) et ont été coupés à 4µm sur lames de verre.

Au fil des étapes d’incubation et de lavages durant IF ou IHC, je vois des morceaux de tissu se détacher ou se replier sur lui-même (voir photo).

 Voici ce que j’ai déjà testé sans succès :

1. Réhydratation des blocs dans l’eau froide

2. Détente des rubans de coupes dans l’eau tiède

3. Placement des coupes sur lames SuperFrost Plus et SuperFrost Plus Gold (variété plus adhérente ou aux propriétés plus prometteuses ?)

4. Incubation des lames à 60 °C de 1 à 15 h avant déparaffinage (temps optimal recommandé ?)

5. Durant déparaffinage après 2e EtOH100%, 15 min à l’étuve 37 °C, puis retour à EtOH100% et []décroissantes

6. Démasquage à basse pression ou en bain marie, voire aucun démasquage

7. Lavages à plat avec compte-goutte et retrait par inclinaison.

Il est à savoir que les colorations ou IHC réalisées à l’automate sont associées à moins de problèmes de détachement, mais des repliements de tissus sont tout de même fréquents (inclus sur la photo).

Je serais très intéressé de savoir si vous avez déjà réglé un problème similaire avec du matériel ou des précautions particulières

Bien histologiquement vôtre,

Alexandre Garneau Université Paris Cité