Bonjour à tous,

Je me permets de vous solliciter afin d’avoir vos avis et vos conseils techniques concernant des difficultés que nous rencontrons sur la plateforme pour une étude lors de la coupe de tissus osseux humains.

Nous travaillons sur des échantillons d’origines et d’états de conservation variables. Certains tissus sont relativement anciens et secs, et n’ont pas nécessairement été fixés dans des conditions optimales, ce qui pourrait contribuer aux difficultés rencontrées lors de leur préparation et de leur coupe.

Nous avons testé plusieurs approches, mais les résultats restent peu satisfaisants.

Voici les principales difficultés observées et les conditions de préparation utilisées :

• Déshydratation et inclusion en paraffine : sur certains échantillons, nous obtenons des blocs présentant un aspect très blanc (voir photos ci-dessous). Le tissu est alors particulièrement friable et difficile à couper. Le tissu semble mal imprégné, parfois des morceaux entiers s'enlèvent.

• Cycles de déshydratation : nous avons principalement utilisé le cycle long P2 (36h), sans mise sous vide, car nous ne disposons pas de l’équipement nécessaire sur la plateforme. Sur d’autres séries, nous avons également testé le cycle P1 (19h), mais les tissus ont alors tendance à éclater dans le bain-marie lors de la coupe. Nous avons même essayé avec des bains neufs mais cela donne également le même résultat. Détails des cycles ci-dessous.

• Décalcification : nous avons utilisé le TBD2 pendant environ deux semaines, en contrôlant régulièrement l’avancement de la décalcification par radiographie aux rayons X, jusqu’à obtention d’une décalcification jugée satisfaisante. Sur d’autres séries, nous avions également testé une décalcification à l’EDTA, plus longue, mais sans amélioration significative des résultats par rapport au TBD2.

La décalcification semble ok, pas de bruit de type "crunch" lors de la coupe.

• Lames et techniques de coupe : nous avons essayé différents types de lames tranchantes, sans amélioration concluante. Nous avons également testé la technique avec récupération des coupes sur scotch sur quelques coupes, mais les résultats n’ont pas été satisfaisants non plus.

  
  

Au vu de ces différents essais, nous avons du mal à identifier les paramètres les plus susceptibles d’être à l’origine de ces problèmes et les ajustements qui permettraient d’améliorer la qualité des coupes.

Auriez-vous des recommandations concernant les conditions de décalcification, les cycles de déshydratation, l’imprégnation en paraffine ou encore les paramètres de coupe à privilégier pour ce type de tissus osseux, notamment lorsqu’ils sont anciens, secs ou issus de prélèvements dont les conditions de fixation ne sont pas optimales ?

Tous vos conseils ou retours d’expérience nous seraient très utiles pour essayer d’améliorer nos résultats.

Merci à vous,

Yoan