Demande de conseils
Bonjour à toutes et à tous,
Tout d'abord, je vous présente mes meilleurs vœux pour cette nouvelle année 2026.
Une utilisatrice de notre plateau souhaite préparer des échantillons congelés des muscles d'une jambe de souris.
Auriez-vous des conseils et protocoles à me partager s'il vous plait concernant la préparation de ce type d’échantillons?
Je vous remercie par avance pour votre aide.
Bonne journée
Anne
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Bonjour Anne,
Bonne année également. Voici le protocole que nous utilisons en routine pour des muscles
•A beaker is filled at 2/3 with isopentane
•Suspend the beaker in a Dewar of liquid Nitrogen, its volume is enough to reach about 1/3 of the beaker
•Prepare at least 10 min before the sample freezing procedure (white crystals appeared in isopentane)
•Place the OCT on ice at least 10 min before embedding
•Ensure a very small amount of OCT around the muscle to allow a complete thin covering
•Use only Tissue-Tek® O.C.T. Compound from Sakura® Finetek (ref.4583 or VWR cat.25608-930)
•Shake the OCT-embedded sample in isopentane for 20 seconds without covering it with isopentane (hold the sample with long forceps)
•Store the frozen samples on dry-ice before transferring them in a -80°C freezer for long term-storage
Le plus important pour ne pas créer d'artéfacts sur les fibres, est de bien couvrir l'échantillon avec une très fine couche d'OCT, de respecter les températures (les cristaux blancs dans l'isopentane, l'OCT froid) et de bien agiter sans plonger l'échantillon sous l'isopentane, ce qui créerait une croûte d'OCT solidifié autour de l'échantillon, ce qui ne permettrait pas aux bulles éventuelles de s'échapper.
Les fibres musculaires doivent rester structurées avec ce protocole.
Bonne chance à ta collègue
Nathalie