Demande conseils pour inclusion en paraffine abeille
Bonjour,
Une utilisatrice travaillant sur les abeilles souhaite inclure un insecte entier en paraffine et réaliser des lames sériées en débitant l’intégralité du bloc. L’objectif est de mettre en évidence, par immunofluorescence, une cible d’intérêt afin d’en étudier la localisation. Nous travaillons avec des coupes de 3µm d'épaisseur.
Nous avons déjà testé une fixation à la PFA 4 % associée à de l’acide nitrique 8 % pendant 8 jours à température ambiante. Afin de favoriser la pénétration du fixateur, l’abdomen a été perforé et les ailes ainsi que les pattes ont été retirées. Cependant, les résultats ne sont pas concluants: les blocs obtenus sont très difficiles à couper, avec de nombreuses déchirures et la présence de trous.
Auriez-vous des conseils, protocoles ou retours d’expérience concernant la préparation d’échantillons d’abeilles pour une inclusion en paraffine, et en particulier des méthodes permettant de ramollir efficacement la cuticule tout en préservant l’antigénicité ?
Merci par avance pour vos retours.
Bien cordialement,
Hanane Mansouri
bonjour Hanane
Je pense que c est une tache difficile de couper des insectes en paraffine car la cuticule est tres dure et rigide. je te proposerai une autre option que j ai exploree (l IF sur le gendarme ), celle de faire une IF sur ton insecte entier et de le transpariser. puis une imagerie soit au confocal soit au microscope lightsheet si il y en a un a proximite de ton labo. cela depend du grossissement souhaite et de ce que tu veux voir. c est je pense plus rapide et moins destructeur.nous avons transparise guepe, frelon (3cm), abeille.inutile de lui arracher les ailes et de perforer l exosquelette. je peux te donner les protocoles . Lors du congres sur le site de l AFH 2026 nous avons montre des images
bonne journee
Brigitte Delhomme