Les cellules souches musculaires jouent un rôle primordial dans la croissance du tissu musculaire ainsi que dans sa régénération. Le gène Paired box 7 (Pax7) est très souvent utilisé comme marqueur moléculaire de ces cellules. Chez les poissons, la localisation de ces cellules par Immunohistochimie (IHC) est difficile par manque d’anticorps spécifiques commerciaux. Une alternative consiste à localiser les ARN messagers (ARNm) par Hybridation in situ (HIS) sur coupes histologiques en paraffine.
L’objectif de ce travail était de trouver une méthode plus sensible que la méthode HIS « classique » révélée en NBT/BCIP qui n’est pas adaptée aux gènes peu exprimés, comme Pax7. Des essais avec différentes méthodes ont été infructueux (révélation TSA en HIS « classique », RNAFISH). C’est la technique RNAscope qui nous a permis de visualiser précisément l’expression du gène Pax7.
La technique RNAscope est une méthode très sensible, basée sur une amplification du signal via l’hybridation spécifique de petites sondes ADN spécifiques. L’ensemble est ensuite révélé soit à l’aide de substrat chromogénique (Red) soit à l’aide de molécules fluorescentes (Opal). Une optimisation de cette technique a consisté à tester différents paramètres (démasquage, durée de protéase, durée de révélation), à transférer la méthode en in toto, notamment sur fibres musculaires isolées, et aussi sur cultures cellulaires de muscle. Enfin nous avons comarqué les ARNm (Pax7) et les protéines (Collagen1) en combinant les techniques RNAscope, et IHC.
Chez la truite arc-en-ciel, nous avons ainsi pu mettre en évidence l’apparition du marqueur Pax7 à partir de stades embryonnaires très précoces jusqu’au stade adulte, et visualiser les cellules satellites le long des fibres musculaires isolées.